过表达B7-H6在自然杀伤细胞介导的肝细胞凋亡中的作用

摘要：

目的:探讨过表达B7同源物6(B7-H6)在自然杀伤(NK)细胞介导的肝细胞凋亡中的作用.方法:设计针对B7-H6全长的寡核苷酸引物,经PCR扩增调取B7-H6全长,并将其亚克隆入线性化的真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组B7-H6过表达载体pIRES2-EGFP-B7-H6,通过双酶切、PCR及测序进行鉴定.利用脂质体将pIRES2-EGFP-B7-H6重组质粒转染正常肝细胞系L02,采用荧光显微镜观察EGFP的表达,流式细胞技术检测转染效率,qRT-PCR 和Western blot 检测B7-H6 mRNA 和蛋白的表达水平.将转染pIRES2-EGFP-B7-H6重组质粒的L02细胞与NK-92细胞以不同的效靶比共培养,利用CCK-8实验分析检测NK-92细胞对L02细胞的杀伤效应.结果:经PCR、酶切及测序等方法证实成功构建pIRES2-EGFP-B7-H6过表达载体;经脂质体转染L02细胞48h后,在荧光显微镜下观察到较强绿色荧光表达,流式检测显示转染效率达到92.6%;qRT-PCR和Western blot结果显示L02细胞B7-H6的mRNA和蛋白高表达;CCK-8实验证实相对于转染空载体pIRES2-EGFP,NK-92细胞对转染了pIRES2-EGFP-B7-H6的L02细胞的杀伤活性显著增强(P<0.05).结论:成功构建过表达B7-H6的真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H6,并进一步证实NK-92细胞对过表达B7-H6的L02细胞具有显著的杀伤效应.

关键词：B7同源物6、真核表达载体、自然杀伤细胞、肝细胞、细胞凋亡

所属期刊栏目：33

分类号：R329.21;R575.1(人体形态学)

资助基金：广东省科技计划资助项目2014A020212575,2016A020215215;广东省自然科学基金资助项目2016A030313357

在线出版日期：2017-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2095-2098