低强度超声联合微泡通过提高ROS水平促进甲状腺癌细胞自噬性死亡

摘要：

目的:探讨低强度超声联合微泡造影剂对甲状腺癌细胞自噬性死亡的作用,并分析自噬的激活机制及其对细胞活力的影响.方法:采用频率20kHz、功率80mW的低强度超声联合微泡造影剂处理人甲状腺癌TPC1细胞,处理细胞60、120和240s后,采用Live/Dead实验和CCK-8实验分析细胞死亡和活力;Western blot分析微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白5(autophagy-re-lated protein 5,ATG5)和SQSTM1/P62的蛋白水平变化;单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色、绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)-LC3转染和透射电镜观察细胞内自噬体的数量;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸脂(DCFDA)染色分析细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的水平,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cys-teine,NAC)抑制氧化应激水平,分析ROS在自噬激活中的作用;ATG5 siRNA转染抑制自噬水平并分析自噬性死亡的作用.结果:低强度超声联合微泡显著促进TPC1细胞死亡,抑制TPC1细胞活力(P<0.05),并与处理时间显著相关.相对于单纯低强度超声组和微泡组,超声联合微泡显著升高LC3-Ⅱ和ATG5蛋白水平,抑制P62蛋白水平(P<0.05).MDC染色、GFP-LC3转染和透射电镜观察发现,超声联合微泡明显增加TPC1细胞中自噬体的数量.超声联合微泡与单纯低强度超声组和微泡组相比,提高了细胞的ROS水平,而NAC显著降低超声联合微泡提高的LC3-Ⅱ蛋白水平(P<0.05).ATG5 siRNA抑制自噬并显著增加细胞活力(P<0.05).结论:本研究说明低强度超声联合微泡可能通过提高甲状腺癌细胞中的ROS水平促进细胞的自噬性死亡,从而引起甲状腺癌细胞死亡.

关键词：甲状腺癌、低强度超声、微泡、自噬、活性氧簇

所属期刊栏目：33

分类号：R736.1;R363(肿瘤学)

资助基金：温州市科技计划Y20170217

在线出版日期：2017-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2000-2008