AR-V7在前列腺癌细胞耐药中的作用

摘要：

目的:探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在前列腺癌细胞耐药中的作用及分子机制.方法:运用Lipofectamine 2000转染法将AR-V7 siRNA(siAR-V7)转染至4株前列腺癌细胞中,命名为PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaP-siAR-V7细胞,以转染无关序列(NC siRNA)为阴性对照.运用real-time PCR和Western blot实验分别检测转染前后细胞中AR-V7的mRNA和蛋白表达水平;运用MTT法和Transwell法分别检测细胞活力和细胞迁移率;运用萤光素酶报告基因实验和Western blot实验分别检测AR的启动子活性及下游靶基因前列腺特异性抗原(PSA)和FK506结合蛋白5(FKBP5)的蛋白表达.构建耐比卡鲁胺的前列腺癌细胞系LNCaP-DR,运用免疫荧光观察LNCaP、LNCaP-siAR-V7和LNCaP-DR细胞中AR和AR-V7的亚细胞定位;运用蛋白质免疫共沉淀实验检测AR-V7与热休克蛋白90(HSP90)的相互作用.结果:4株前列腺癌细胞中的AR-V7 mRNA水平显著高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P<0.05);PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaP-siAR-V7细胞中AR-V7蛋白水平、细胞活性及细胞迁移率显著低于NC siRNA转染的细胞(P<0.05).随着比卡鲁胺剂量的增加,所有细胞活力逐渐降低,而下调AR-V7表达显著增强前列腺癌细胞对比卡鲁胺的敏感性(P<0.05).Western blot结果显示下调AR-V7表达显著抑制AR启动子活性,其下游PSA和FKBP5蛋白水平明显降低(P<0.05).免疫荧光结果发现AR和AR-V7主要存在于前列腺癌细胞核内,AR少量存在于细胞质中;下调AR-V7表达则抑制AR的核转运;AR存在于耐药细胞核中,AR-V7在耐药细胞中高表达.免疫共沉淀结果显示内源性AR-V7与HSP90相互作用.结论:AR-V7在前列腺癌细胞中高表达,下调AR-V7的表达显著抑制前列腺癌细胞活力和迁移;前列腺癌细胞耐药与AR-V7高表达相关,其机制可能通过AR-V7与HSP90相互作用介导AR-V7的核转运,激活AR信号通路调控下游靶基因的转录活性最终导致细胞耐药.

关键词：雄激素受体剪接变异体7、前列腺癌、耐药性、免疫共沉淀

所属期刊栏目：33

分类号：R730.23;R737.25(肿瘤学)

在线出版日期：2017-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1874-1881