TNF-α诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死

摘要：

目的: 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)能否诱导小鼠长骨骨样细胞株MLO-Y4发生程序性坏死及其发生机制.方法: 将MLO-Y4细胞分为正常对照(control)组、TNF-α处理组、TNF-α+necrostatin-1 (Nec-1)处理组、TNF-α+Z-VAD处理组和TNF-α+受体相互作用蛋白3(RIP3)-siRNA组.用流式细胞术检测各组细胞凋亡或坏死率,透射电镜鉴定细胞形态学变化,用Western blot法测定RIP1、RIP3和cleaved caspase-3的蛋白水平,应用激光共聚焦显微镜观察RIP1和RIP3蛋白的共表达,应用荧光标记法检测各组细胞活性氧(ROS)水平.结果: TNF-α诱导MLO-Y4细胞24 h,凋亡和坏死率明显高于control组(P<0.01).与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD和RIP3-siRNA均能降低细胞的凋亡或坏死率(P<0.01).在TNF-α组可见大量坏死样细胞,在Z-VAD组仍可见到坏死样细胞,而在Nec-1和RIP3-siRNA组未见到坏死样细胞.Western blot实验结果显示Nec-1可有效抑制RIP1蛋白表达,而Z-VAD对RIP1和RIP3蛋白表达无影响,RIP3-siRNA可有效降低RIP3蛋白表达(P<0.01).与TNF-α组比较,Nec-1可有效降低RIP1-RIP3蛋白共表达阳性细胞百分率(P<0.01),而Z-VAD对其无影响.与control组相比,TNF-α组的ROS水平明显增高(P<0.01);与TNF-α组相比,Nec-1、Z-VAD及RIP3-siRNA均能有效抑制ROS水平(P<0.01).结论: TNF-α能诱导MLO-Y4细胞发生RIP3介导的程序性坏死;ROS可能是MLO-Y4细胞程序性坏死的执行者.

关键词：肿瘤坏死因子α、程序性坏死、受体相互作用蛋白3、MLO-Y4细胞

所属期刊栏目：33

分类号：R681(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：海南省自然科学基金资助项目817326

在线出版日期：2017-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1499-1505