自噬通过抑制C／EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

摘要：

目的：研究自噬对氧化低密度脂蛋白（ oxidized low-density lipoprotein ，ox-LDL）所致巨噬细胞凋亡的影响，并探讨可能的分子机制。方法：体外培养RAW264．7巨噬细胞，分别给予3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA；3 mmol／L）、雷帕霉素（rapamycin，Rap；1μmol／L）或4-苯丁酸（4-phenylbutyric acid，PBA；4 mmol／L）预处理1 h，再加入ox-LDL（100 mg／L）继续培养12 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况；相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶（ lactic dehydrogenase ，LDH）和细胞内caspase-3活性；采用Western blot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78（ glucose-regulated protein 78，GRP78）及促凋亡蛋白C／EBP同源蛋白（ C／EBP homologous protein ，CHOP）表达的变化；采用激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）的变化。结果：ox-LDL处理可显著降低巨噬细胞活力，并增加LDH漏出、凋亡率及caspase-3活性；ox-LDL对细胞的上述损伤作用可被自噬抑制剂3-MA促进而被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。 ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应，表现为beclin-1表达上调，LC3颗粒化显著；ox-LDL对自噬的诱导作用可被3-MA抑制而被Rap增强。另外，3-MA可促进ox-LDL所诱导的CHOP进一步上调，而Rap可明显拮抗ox-LDL对CHOP的诱导作用。 PBA可显著抑制ox-LDL所诱导的GRP78上调，且明显减轻ox-LDL所诱导的自噬反应，表现为beclin-1表达下调，LC3颗粒化程度减弱。结论：内质网应激介导ox-LDL对巨噬细胞自噬的诱导作用，而一定程度的自噬可通过抑制CHOP表达从而减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡。

关键词：自噬、内质网应激、氧化低密度脂蛋白、巨噬细胞、细胞凋亡

所属期刊栏目：32

分类号：R363.2(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No．81570410；No．81370381；国家级大学生创新训练项目201510439126；201510439100

在线出版日期：2016-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2192-2198