内皮祖细胞培养上清对高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖和分化的影响

摘要：

目的:研究高氧暴露对内皮祖细胞(EPCs)旁分泌功能的影响,并探索EPCs旁分泌因子对高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)功能的影响.方法:分离大鼠骨髓来源的单个核细胞,EGM-2MV培养基培养7 ～10 d获取EPCs,并对其进行鉴定.分别在空气条件下及60％的氧浓度条件下培养EPCs,收集空气组EPCs培养上清(E-CM-RA)和高氧组EPCs培养上清(E-CM-O2),ELISA法检测2组上清中VEGF、FGF10、EGF及PDGF-BB的表达水平.分离纯化培养成年大鼠的AECⅡ,常规培养至第2天,分为4组:(1)RA组:空气条件下培养;(2) O2组:60％的氧浓度条件下培养;(3) O2+ E-CM-RA组:在O2组的基础上,在培养基中加入E-CM-RA;(4) O2 +E-CM-O2组:在O2组的基础上,在培养基中加入E-CM-O2.分别在干预12h、24 h、2d和3d,用MTF法及细胞计数法检测4组AECⅡ的增殖情况;在24 h、2d和3d用real-timePCR法检测4组AECⅡ中SP-C和AQP5的mRNA表达量.结果:E-CM-RA中VEGF及FGF10的表达水平明显高于E-CM-O2 (P ＜0.05).干预不同时间,各组间AECⅡ的活力及数量均有明显差异(P＜0.01).与RA组相比,O2组AECⅡ各时点的活力明显下降,数量明显减少(P＜0.05);与O2组相比,各时点O2+E-CM-RA组AECⅡ的活力明显增高,数量明显增加(P＜0.05);但O2+ E-CM-O2组与O2组AECⅡ的活力及数量均无显著差异.干预24 h、2d及3d,4组间AECⅡ的SP-C与AQP5 mRNA的表达量均具有明显差异(P＜0.01).与RA组相比,O2组AECⅡ中SP-C的mRNA表达量显著降低(P＜0.01),AQP5的mRNA表达量显著升高(P＜0.01).与O2组相比,在24 h、2d及3d时,O2+ E-CM-RA组和O2+E-CM-O2组AECⅡ中SP-C的mRNA表达量显著增高(P＜0.05),而在2d及3d时,AQP5的mRNA表达量显著降低(P＜0.01).结论:EPCs可分泌肺发育相关生长因子VEGF和FGF10,高氧暴露抑制EPCs表达VEGF和FGF10.高氧暴露抑制AECⅡ的增殖,降低AECⅡ表达SP-C mRNA,促进AECⅡ表达AQP5 mRNA.EPCs培养上清能够改善高氧暴露对AECⅡ增殖的抑制作用,维持AECⅡ本身特性,抑制AECⅡ向AEC Ⅰ分化.而高氧暴露部分削弱了EPCs培养上清的这种作用,这可能与高氧暴露抑制EPCs表达肺发育相关因子VEGF和FGF10有关.

关键词：内皮祖细胞、旁分泌功能、肺泡Ⅱ型上皮细胞、高氧损伤

所属期刊栏目：32

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81270727

在线出版日期：2016-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：8-14