10.3969/j.issn.1000-4718.2015.11.023
干扰P2X7R基因对RAW264.7细胞增殖和吞噬的影响
目的:应用RNA干扰技术抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞P2X7受体( P2X7 R)基因的表达,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法:用脂质体法将P2X7 R shRNA重组质粒转染至RAW264.7细胞,经 G418筛选后获得稳定干扰细胞株。细胞分为野生型( WT )组、阴性对照( NC )组和干扰(shP2X7R)组。 Real-time PCR法检测细胞中P2X7R mRNA的表达,Western blot检测细胞中P2X7R蛋白的表达;CCK-8方法检测细胞生长活性,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)掺入实验检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期的分布和吞噬情况。结果:P2X7 R shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的P2X7 R mR-NA和蛋白的表达,抑制率在80%以上。48 h后,shP2X7R组细胞的生长速度明显高于NC组和WT组(P<0.05),增殖期细胞比例明显升高(P<0.05),说明下调P2X7R基因能明显促进细胞增殖。 shP2X7R组的细胞周期出现改变,S期和G2/M期的比例明显上升,增殖指数增高(P<0.05)。 shP2X7R组的细胞吞噬活性明显高于NC组(P<0.05)。结论:本研究成功构建了稳定干扰P2X7 R基因表达的小鼠巨噬细胞株RAW264.7,shP2X7 R能够明显促进RAW264.7细胞的增殖,改变了细胞的吞噬活性。
P2X7 受体、RNA干扰、RAW264.7巨噬细胞、细胞增殖、细胞吞噬
R363(病理学)
国家自然科学基金资助项目 No.81102088; No.81441101;天津市自然科学基金资助项目 No.12JCYBJC16600;No.13JCYBJC22000;武警后勤学院附属医院重点项目No.FYJ201510;武警后勤学院附属医院种子基金资助项目FYM201107;FYM201538
2015-12-14(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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