10.3969/j.issn.1000-4718.2015.04.022
NF-κB 参与枸橼酸铁铵过载诱导的人肝细胞 hepcidin 基因表达
目的:研究核因子κB( NF-κB)在枸橼酸铁铵过载诱导人肝细胞铁调素( hepcidin)基因表达中的调控作用。方法:依据前期不同浓度枸橼酸铁铵抑制人肝细胞HH4增殖实验结果,选取0.1、1、5和10 mmol/L枸橼酸铁铵处理人肝细胞HH448 h,半定量PCR法检测胞内hepcidin的表达水平;利用染色质免疫共沉淀( ChIP)、电泳迁移率实验( EMSA)和双萤光素酶报告基因检测系统,并结合胞内NF-κB活性抑制实验,确定NF-κB对人hepci-din转录活性的影响。结果:5 mmol/L和10 mmol/L浓度的枸橼酸铁铵处理细胞后,hepcidin表达水平显著增强;ChIP和EMSA实验证实NF-κB能够与hepcidin基因启动子结合;重组萤光素酶报告质粒TOPFlash-pHepcidin相对萤光素酶活性明显高于对照组;与重组质粒TOPFlash-pHepcidin相比,突变重组萤光素酶报告质粒TOPFlash-pHep-cidin-mut相对萤光素酶活性显著降低;NF-κB抑制剂BAY 11-7082显著降低了hepcidin基因的表达。结论:NF-κB参与了铁过载诱导的人hepcidin基因表达。这为进一步深入研究肝细胞铁过载模式下多因子协同调控hepcidin基因表达的具体分子机理奠定了基础。
核因子κB、染色质免疫共沉淀、电泳迁移率实验、双萤光素酶报告基因检测系统、铁调素
R363(病理学)
2015-04-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共7页
695-701