咪唑克生对体外血脑屏障炎症模型通透性的影响

摘要：

目的：观察咪唑克生（ idazoxan，IDA）对体外血脑屏障（ blood-brain barrier， BBB）炎症模型的通透性、紧密连接蛋白ZO-1表达和分布及基质金属蛋白酶-9（ matrix metalloproteinases-9，MMP-9）和MMP-9抑制物———金属蛋白酶组织抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1， TIMP-1）表达的影响。方法：采用培养7 d的小鼠脑微血管内皮细胞株b．End3建立体外BBB模型，采用TNF-α（10 nmol／L）处理24 h诱导BBB炎症模型，并对BBB炎症模型分别采用IDA 50、100、200μmol／L预处理6 h以观察IDA对BBB炎症模型的作用。通过检测异硫氰酸荧光标记的葡聚糖通过率来确立模型的通透性，采用Western blot法检测紧密连接蛋白ZO-1的表达，通过免疫荧光法观察ZO-1的分布情况，并通过RT-PCR法检测MMP-9／TIMP-1的表达。结果：培养7 d的b．End3细胞汇合成稳定的单层连接，有较好的屏障功能，而采用TNF-α处理24 h后诱导的BBB炎症模型的通透性明显升高，紧密连接蛋白ZO-1在膜上的表达明显减少、不连续，Western blot法显示ZO-1蛋白表达水平明显下降，MMP-9的表达明显升高；而采用IDA 50、100、200μmol／L预处理6 h能明显降低其通透性，增加ZO-1蛋白的表达和改善ZO-1的分布异常，降低MMP-9的表达，其中200μmol／L IDA作用最明显，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：IDA能够直接作用于脑血管内皮细胞，降低TNF-α诱导的体外BBB炎症模型MMP-9的表达，增加紧密连接蛋白ZO-1的表达、修复紧密连接ZO-1的异常分布，从而改善其异常增高的通透性。

关键词：咪唑克生、血脑屏障、紧密连接、ZO-1、基质金属蛋白酶-9、组织型基质金属蛋白酶抑制物-1

分类号：R363.2(病理学)

资助基金：浙江省自然科学基金资助项目No．LQ12H09002；温州市科技计划项目Y20140283

在线出版日期：2015-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：669-674