Ag85B慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达

摘要：

目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制.方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体pLVX-IRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒).用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率.利用Lipofectamine(R) 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组.Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平.结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×10H TU/L,感染效率达到90％以上.Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NH-BEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达.与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05).结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症.

关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素、胸腺基质淋巴细胞生成素受体、慢病毒载体、抗原85B、人支气管上皮细胞

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分类号：R363;R562.2+5(病理学)

资助基金：广州市科技计划2014J4100040;广东省自然科学基金资助项目S2011010003664

在线出版日期：2015-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2015-2020