免疫纳米微粒靶向胰腺癌细胞输送siRNA 的方法研究

摘要：

目的：构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送siRNA的免疫纳米载体。方法：检测纳米载体IONP-PEI（非靶向组）及其与siRNA复合物的表征；通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRNA的最佳N/P比值；细胞免疫荧光和普鲁士蓝染色观察scFvCD44v6偶联IONP-PEI的靶向纳米载体（靶向组）在细胞内分布；流式细胞术、荧光显微镜观察、real-time PCR和Western blotting检测靶向组和非靶向组的转染率和转染siKRAS后的干扰效果。结果：IONP和PEI的最适质量比为0．75；纳米载体复合siRNA的最佳N/P比值为20；IONP-PEI/siRNA复合物的电位为（21．73±8．07） mV，粒径为（51．3±2．2） nm。荧光显微镜显示，非靶向组和靶向组转染后均在细胞内，靶向组的转染率为（89．75±1．81）％，高于非靶向组的（59．87±4．52）％，且靶向组的荧光强度高于非靶向组。靶向组的KRAS mRNA的相对表达量为（34．02±6.15）％，低于非靶向组的（51．09±6．70）％；Western blotting 显示靶向组的KRAS蛋白表达量低于非靶向组。结论：非靶向组和靶向组均能够将siRNA转染进细胞内，且靶向组具有更高的转染效率和更好的干扰基因表达效果。本课题构建的scFvCD44v6-IONP-PEI是一种高效、安全和靶向识别胰腺癌细胞的免疫纳米载体。

关键词：胰腺肿瘤、纳米微粒、基因治疗、靶向

分类号：R392-33

资助基金：国家自然科学基金资助项目No．30670951；No．81072045；国家自然青年科学基金资助项目No．81302140；中山大学医科青年培育项目14ykpy29

在线出版日期：2014-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1567-1573