转录因子 ZFP580在缺氧预处理抗大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤中的作用

摘要：

目的：通过观察缺氧预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变，探讨ZFP580的作用及机制。方法：培养大鼠H9c2心肌细胞，分为3组：（1）缺氧/复氧（H/R）组：H9c2心肌细胞换用模拟缺血溶液（pH＝6．2）缺氧（95％N2＋5％CO2）培养3 h，复氧培养2 h；（2）缺氧预适应（HPC）组：H9c2心肌细胞经3个循环的短暂缺氧（10 min）/复氧（20 min）处理后，进行同上H/R实验；（3）对照（C）组：正常培养的H9c2心肌细胞。通过MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。 Western blotting方法观察心肌细胞中转录因子ZFP580表达及ERK1/2磷酸化情况，以及ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059对ZFP580表达的影响。分别构建高/低表达ZFP580的慢病毒载体并转染H9c2心肌细胞，经H/R实验后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况，Western bloting方法观察caspase-3活化情况。结果： HPC能显著改善H/R处理后H9c2心肌细胞存活率降低和LDH漏出的现象。 Western blotting 结果显示，HPC组心肌细胞中ZFP580表达及ERK1/2磷酸化程度较H/R处理组明显上升，且PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调。慢病毒介导的基因转染实验发现，ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/R损伤后凋亡率降低且细胞中活化caspase-3表达下降。结论：HPC可引起心肌细胞中转录因子ZFP580表达上调，ZFP580作为ERK1/2通路的下游靶分子发挥抗心肌细胞凋亡的作用。 ZFP580表达上调可能作为内源性保护机制之一介导了HPC的细胞保护作用。

关键词：转录因子、锌指、缺氧预处理、细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No．81170106； No．81370439；天津市应用基础与前沿技术研究计划面上项目No．12JCYBJC15900；武警后勤学院面上项目WYM201108

在线出版日期：2014-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1553-1558