脂多糖通过PI3K／Akt／mTOR通路调控巨噬细胞自噬

摘要：

目的：观察脂多糖对巨噬细胞自噬活化的影响及相关信号通路的探讨。方法：体外培养巨噬细胞株RAW264．7，分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯脂多糖（LPS）刺激组、LPS＋PI3K抑制剂（hVps34）组和LPS＋mTOR抑制剂（雷帕霉素）组。构建荧光真核表达载体pcDNA3．1-GFP-LC3，转染巨噬细胞，通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况。 qRT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的Atg5、Atg7、LC3-II和Bnip3 mRNA表达水平的改变。利用Western blotting检测LC3-II、p-Akt和p-mTOR蛋白在各组中的表达情况，以评价LPS激活巨噬细胞自噬的分子通路。结果：成功构建稳定表达GFP-LC3的巨噬细胞，在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS＋hVps34组和LPS＋雷帕霉素组均有明显增强；qRT-PCR检测到Atg5、LC3-II和Bnip3 mRNA的表达在饥饿状态组、LPS＋hVps34组和LPS＋雷帕霉素组均有明显增强，而在LPS组中略微下降；Western blotting 检测发现p-Akt在饥饿状态组、LPS组和LPS＋雷帕霉素组中表达明显升高；p-mTOR在饥饿状态组、LPS＋hVps34组和LPS＋雷帕霉素组表达明显下降；LC3-II的表达在饥饿状态组、LPS＋hVps34组和LPS＋雷帕霉素组中表达要高于对照组和LPS组。结论：LPS参与巨噬细胞自噬的调控，其可能的信号通路为PI3K/Akt/mTOR通路，但仍存在其它有效的调控通路。

关键词：脂多糖类、自噬、巨噬细胞、Akt

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No．81101947；广东省科技社会发展项目2012B032000006

在线出版日期：2014-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：675-680