雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤

摘要：

目的:建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用.方法:原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度.建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞.实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERα mRNA和蛋白表达水平.实验分为3组:(1)对照组:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞;(2)雌激素组:用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;(3)慢病毒组:用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞.流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的变化.结果:成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90％.成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERα mRNA和蛋白表达水平(P＜0.01).与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P＜0.05),且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低(P＜0.05),免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少(P＜0.01).结论:雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现.

关键词：雌激素、雌激素受体α、谷氨酸、神经元

所属期刊栏目：30

分类号：R741.05(神经病学与精神病学)

资助基金：贵州省科技厅攻关项目黔科合sy[2009]3054;贵州省优秀科技教育人才省长专项资金资助项目黔省专合字[2010]86

在线出版日期：2014-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：121-127