人EGFL7基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人喉癌细胞中的表达

摘要：

目的:构建人表皮生长因子样结构域7(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,并建立稳定干扰EGFL7基因表达的喉癌细胞亚系,为研究EGFL7蛋白在喉癌发生发展中的功能奠定基础.方法:针对人EGFL7基因序列,设计特异性RNAi靶序列,与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR线性载体定向连接,得到的阳性重组子再与pLenti6.3-MCS/V5-DEST慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体.在POLOdelivererTM 3000介导下将慢病毒包装质粒和EGFL7基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人喉癌细胞HEp-2,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰EGFL7基因的细胞亚系.结果:成功构建EGFL7 pLenti6.3-EGFL7-miR真核表达慢病毒干扰载体并获得相应慢病毒,经测定病毒滴度为5×1011 TU/L,实时荧光定量PCR证实pLenti6.3-EGFL7-miR慢病毒载体对喉癌细胞HEp-2 EGFL7基因的沉默效率为97％.结论:成功构建人EGFL7基因特异性的慢病毒干扰载体,并获得EGFL7基因稳定干扰的喉癌细胞亚系.

关键词：EGFL7蛋白、RNA干扰、喉肿瘤、慢病毒

所属期刊栏目：29

分类号：R363(病理学)

资助基金：高校基本科研业务费中山大学青年教师培育计划11ykpy43;广东省自然科学基金博士启动基金资助项目S2012040006622;广东省对外合作项目2012B050600015

在线出版日期：2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1864-1869