WT1异构体比例转变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响

摘要：

目的:探讨WT1异构体比例改变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响.方法:逆转录获得人WT1(17AA-/KTS-)异构体全长cDNA序列,连接到PCDH1-MCS1-EF1-copGFP慢病毒质粒载体上,酶切和测序证实正确构建重组质粒,建立WT1异构体表达比例改变的单克隆细胞株.MTT法检测细胞增殖活性,形态学观察及Annexin Ⅴ检测细胞凋亡.结果:成功构建了真核表达载体PCDH1-MCS1-EF1-copGFP-WT1(17AA-/KTS-),转染HL-60细胞后,实时荧光定量RT-PCR和Western blotting显示重组质粒转染细胞中WT1(17AA-/KTS-)mRNA和蛋白水平明显高于空质粒转染组和正常对照组.重组质粒转染细胞的生长抑制率高于空质粒转染组和正常对照组,差异显著(P＜0.05).加2 μmol/L三氧化二砷(As2O3)培养48h后,形态学观察发现3组细胞都出现了凋亡形态,但重组质粒转染细胞更为明显.流式细胞术结果显示,As2O3作用24h后,重组质粒转染细胞凋亡率较空质粒转染组和正常对照组细胞升高,差异显著(P＜0.05).结论:增加外源性WT1(17AA-/KTS-)异构体的表达能抑制HL-60细胞增殖,促进As2O3诱导的细胞凋亡.

关键词：WT1蛋白、蛋白异构体、白血病、细胞凋亡

所属期刊栏目：29

分类号：R363(病理学)

资助基金：山西省自然科学基金资助项目2010011047-2

在线出版日期：2013-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：923-927