MDR1基因沉默增强三尖杉酯碱诱导的HT9细胞凋亡

摘要：

目的:探讨靶向P-糖蛋白(又称多药耐药蛋白1,MDR1)基因的shRNA对三尖杉酯碱诱导人耐三尖杉酯碱的前髓细胞白血病HT9细胞凋亡的影响.方法:构建MDR1基因特异的shRNA表达载体pSilencer 3.1-H1 neo-MDR1,稳定电转染HT9细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测细胞MDR1蛋白表达,MTT法检测细胞活力,经三尖杉酯碱处理后琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA片段化,激光共聚焦观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期变化.结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer 3.1-H1 neo-MDR1,稳定转染后,HT9细胞MDR1 mRNA和蛋白表达均显著降低,HT9细胞三尖杉酯碱的 IC50由(1.184±0.130)mg/L降至(0.711±0.010)mg/L.与HT9细胞相比,经三尖杉酯碱处理后稳定转染细胞HT9/sh-3.1-1的DNA ladder更明显,激光共聚焦显微镜下可见形态不规则的碎片状或梅花状等典型的细胞凋亡形态;细胞的S期细胞增多,并出现明显的凋亡峰.结论:shRNA表达载体pSilencer 3.1-H1 neo-MDR1能够稳定、持久地抑制MDR1基因,并有效增强三尖杉酯碱诱导的HT9细胞凋亡.

关键词：短发夹RNA、多药耐药、P-糖蛋白、HT9细胞、三尖杉酯碱

所属期刊栏目：28

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：黑龙江省自然科学基金资助项目C200624;黑龙江省教育厅科学技术项目11511447,12511611;齐齐哈尔大学青年教师科研启动项目2011K-M38

在线出版日期：2012-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1235-1240