pDC315-SPA-mCLCA3载体的构建及其在气道上皮细胞系的靶向表达分析

摘要：

目的:构建腺病毒穿梭质粒(pDC315)-肺表面活性蛋白A基因启动子(SPA)-小鼠钙激活氯通道3(mCLCA3)融合基因表达载体,分析其在气道上皮细胞系的靶向表达.方法:PCR法从 PGL-SPA 和 pCR-Blunt II-TOPO载体中克隆全长2 948 bp的SPA-mCLCA3基因序列并将其亚克隆入pDC315-EGFP 载体,构建pDC315-SPA-mCLCA3靶向表达载体.测序鉴定正确后分别转染气道上皮细胞系(H441细胞)和非气道上皮细胞系(HEK293细胞).每种细胞分pDC315-EGFP组(EGFP阳性,mCLCA3阴性)和 pDC315-SPA-mCLCA3组(mCLCA3阳性),分析mCLCA3在不同上皮细胞的表达水平.结果:测序结果证实成功构建含有气道上皮细胞特异性启动子SPA的mCLCA3重组质粒.靶向表达分析表明mCLCA3 mRNA在高表达SPA的H441细胞中表达显著高于其在HEK293细胞的表达(P<0.05);免疫细胞化学表明H441细胞pDC315-SPA-mCLCA3组中mCLCA3蛋白表达阳性而pDC315-EGFP组表达阴性,HEK293细胞两种质粒转染组mCLCA3蛋白均阴性.结论:成功构建气道上皮细胞靶向表达mCLCA3基因的重组腺病毒穿梭载体pDC315-SPA-mCLCA3,为后续构建腺病毒靶向载体Ad -SPA-mCLCA3及研究mCLCA3在气道上皮缺陷中的作用提供实验基础.

关键词：肺表面活性物质相关蛋白A启动子、CLCA3蛋白、小鼠、气道上皮细胞、靶向表达

所属期刊栏目：27

分类号：R363(病理学)

资助基金：武汉市科学技术计划资助项目 200850731357

在线出版日期：2011-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1240-1244