大鼠肺动脉平滑肌细胞Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及机制

摘要：

目的:研究Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及信号转导途径,探讨它们在肺血管重构中的作用机制.方法:分离培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,应用血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)启动肺动脉平滑肌细胞Rho激酶信号通路,应用骨形态发生蛋白2(BMP-2)启动BMP信号通路,并用Rho激酶抑制剂Y-27632、MEK抑制剂U0126进行干预.培养细胞分成5组:(1)对照组;(2)BMP-2组;(3)BMP-2+PDGF-BB组;(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组;(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126组.免疫荧光染色标记p-Smad1在细胞核内外的分布并计算p-Smad1核迁移阳性细胞百分数(即核迁移率).分离平滑肌细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blotting分析p-Smad1在细胞内的总量和细胞核内外相对含量的变化.Kit-WST-8试剂盒检测细胞增殖.结果:BMP-2组p-Smad1在细胞内的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率明显高于对照组(P＜0.05);BMP-2+PDGF-BB 组p-Smad1的核迁移率和在细胞核中的相对含量明显低于BMP-2组(P＜0.05),但是细胞内p-Smad1总量无明显改变(P＞0.05);BMP-2+PDGF-BB+ Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组细胞内p-Smad1的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率与BMP-2组基本相似(P＞0.05).BMP-2组的A值明显小于对照组(P＜0.05);PDGF-BB+BMP-2组的A值明显大于BMP-2组(P＜0.05)且大于对照组(P＜0.05);BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组的A值均小于PDGF-BB+BMP-2组(P＜0.05).结论:在大鼠肺动脉平滑肌细胞,PDGF-BB激活的Rho激酶通过MEK/ERK1/2抑制BMP-2引起的p-Smad1核迁移,促进平滑肌细胞增殖.

关键词：肺动脉、平滑肌细胞、Rho激酶、骨形态发生蛋白质2、p-Smad1核迁移

所属期刊栏目：27

分类号：R363(病理学)

资助基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目2008BS03017

在线出版日期：2011-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：443-449