脂肪分化相关蛋白真核表达载体的构建及其对H9c2心肌细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein, ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响.方法:(1)RT-PCR扩增编码ADRP全长的 DNA 序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒并进行鉴定;采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒稳定转染H9c2心肌细胞;荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况;RT-qPCR和Western blotting检测ADRP表达情况;(2)采用MTT比色法和流式细胞术检测不同浓度软脂酸对细胞增殖和凋亡的影响.结果:(1)成功构建了真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,转染H9c2细胞后,荧光显微镜下观察发现细胞内有绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR和Western blotting显示重组质粒转染H9c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P＜0.01);(2)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9c2细胞增殖抑制率和凋亡率均明显低于空质粒转染组和正常对照组(P＜0.05).结论:(1)成功获得了稳定表达ADRP的H9c2心肌细胞株;(2)软脂酸可抑制H9c2心肌细胞增殖并可诱导其凋亡,而ADRP高表达可对抗软脂酸的这一作用,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用.

关键词：脂肪分化相关蛋白质、H9c2细胞、棕榈酸、细胞凋亡

所属期刊栏目：27

分类号：R589.2(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30270627

在线出版日期：2011-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：223-228