pDC316-hIL-12-IRES-CKb双顺反子重组腺病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达

摘要：

目的:构建含肌酸激酶(CK)基因和人白细胞介素12(hIL-12)基因的双顺反子重组腺病毒载体pDC316-hIL-12-IRES-CKb,并包装成重组腺病毒,检测其在肝细胞中蛋白表达和肝脏中磷酸肌酸的水平.方法:将PCR 扩增的产物CK片段和hIL-12片段顺次插入双顺反子腺病毒载体(IES)中,经同源重组、包装和扩增获得重组腺病毒子.再用该病毒感染体外培养的兔肝细胞,经Western blotting检测到 CK 蛋白的表达和ELISA检测培养液中hIL-12水平.结果:体外实验在感染肝细胞后检测到CK和hIL-12蛋白的表达;同时体内实验应用核磁共振波谱(MRS)的方法能检测到肝脏特异性CK产物磷酸肌酸的水平.结论:携带CK和hIL-12基因的双顺反子重组腺病毒能使CK 基因异源性地表达在肝脏并能用非侵袭性的MRS技术检测其表达.此载体的构建为进一步研究CK基因作为一个影像报告基因动态监测肝脏治疗基因hIL-12的表达奠定基础.

关键词：双顺反子腺病毒载体、肌酸激酶、白细胞介素12、原代肝细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R318.04(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30670591;广州市社会公益应用基础研究计划资助项目2007JI-C0061

在线出版日期：2010-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2180-2184