稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究

摘要：

目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据.方法:通过PCR 技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23 基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23.将该载体导入AmphoPackTM-293 细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418 抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系.采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位.结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白.共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23 定位于细胞质,处于细胞核周边.结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系.该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程.

关键词：巨细胞病毒、基因、UL23、逆转录病毒

所属期刊栏目：26

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30770106;国家自然科学基金重大计划面上资助项目90608024;广东省自然科学基金资助项目06025162

在线出版日期：2010-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：966-970