ANX A2在抗磷脂抗体诱导THP-1细胞组织因子表达中的作用

摘要：

目的:构建针对人膜联蛋白A2(ANX A2)的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,转染THP-1细胞,探讨ANX A2在抗磷脂抗体(APL)诱导单核细胞组织因子(TF)表达中的作用.方法:设计4条ANX A2特异性RNAi的寡核苷酸序列,与慢病毒载体pGCSIL-GFP连接,PCR及测序鉴定正确后,Western蛋白印迹法筛选出有效干扰序列.包装293T细胞获得重组慢病毒LV-RNAi-ANX A2,感染单核细胞株THP-1,观察细胞ANX A2 mRNA和蛋白表达下降程度.再用APL/β_2GPI复合物刺激干扰后的THP-1细胞,观察TF mRNA表达及TF活性变化.结果:成功构建RNAi慢病毒载体并筛选出有效干扰片段;包装293T细胞后病毒滴度为3×10~(12)TU/L;感染THP-1后细胞ANX A2 mRNA和蛋白均被沉默.APL/β_2GPI复合物刺激干扰后的THP-1细胞,其TF表达下降至基础水平.结论:构建的慢病毒表达载体能显著抑制THP-1细胞ANX A2的表达,进而影响APL诱导的TF表达,证明ANX A2在APL诱导的单核细胞表达TF过程中具有重要作用.

关键词：RNA干扰、慢病毒载体、膜联蛋白A2、抗磷脂抗体、组织因子

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分类号：R593.2(全身性疾病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30370602,30670907;浙江省自然科学基金资助项目Y206830;浙江省教育基金资助项目20060746

在线出版日期：2010-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2447-2453