融合蛋白CXCL10-loop3- EGF的可溶性表达及其抗肿瘤效应研究

摘要：

目的:构建重组趋化因子CXCL10及表皮生长因子受体干扰序列融合蛋白(CXCL10-loop3-EGF),验证其靶向性抗肿瘤效应及抑制血管形成活性.方法: 运用RT-PCR从经IFN-γ刺激活化的PBMC中扩增人CXCL10基因,运用重叠延伸PCR法扩增CXCL10-loop3-EGF融合基因,并将其与载体pTG19-T连接、转化大肠杆菌DH5α、筛选阳性克隆,CXCL10-loop3-EGF融合基因与载体pET32a(+)连接、转化大肠杆菌Origami B(DE3),诱导可溶性表达重组his-CXCL10- loop3-EGF融合蛋白,并经镍柱亲和层析、酶切、超滤及透析等方法获得纯化的重组CXCL10- loop3-EGF融合蛋白.通过Transwell细胞趋化实验及HUVEC血管形成抑制实验验证此融合蛋白的抗肿瘤效应.结果: SDS-PAGE和Western blotting证实CXCL10- loop3-EGF融合蛋白构建成功,纯化后的融合蛋白具有显著的趋化活化PBMC活性及抑制HUVEC血管形成活性.结论: 成功构建融合蛋白CXCL10- loop3-EGF,该蛋白具有较好的靶向性抗肿瘤活性.

关键词：CXCL10-loop3-EGF融合蛋白、可溶性表达、抗肿瘤效应

所属期刊栏目：25

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：浙江省医药卫生科技计划基金资助项目2005A108

在线出版日期：2010-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2376-2380