大鼠心肌细胞结缔组织生长因子的诱导表达及RNA干扰研究

摘要：

目的:探讨心肌细胞对结缔组织生长因子(CTGF)的基础表达及转化生长因子β1(TGF-β1)对其分泌的诱导作用,并进一步研究以RNA干扰(RNAi)技术靶向抑制CTGF对下游纤维化因子的影响.方法:实验分为以下5组: 组Ⅰ:单纯心肌细胞组;组Ⅱ:TGF-β1诱导组;组Ⅲ:阴性质粒组;组Ⅳ:RNAi组;组Ⅴ:脂质体组.分离培养Sprague Dawley(SD)大鼠乳鼠心肌细胞,以5 μg/L终浓度的TGF-β1对培养的心肌细胞进行诱导,再通过脂质体法将靶向大鼠CTGF的短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染入心肌细胞,流式细胞技术分选出成功转染的细胞.通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)技术进一步研究各实验组心肌细胞CTGF、纤维连接蛋白(FN)mRNA及蛋白的表达水平.结果:单纯心肌细胞组对CTGF、FN均有低水平的基础分泌,在予以TGF-β1诱导后表达水平显著升高(P＜0.01);而在靶向特异性RNAi后,上述因子的表达均被显著抑制(P＜0.01);并且纤维化因子FN的表达水平与促纤维化因子CTGF的表达显著相关.结论:心肌细胞可自主低水平分泌或诱导后高表达CTGF及下游纤维化因子FN,提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化及心脏重塑过程;而通过RNAi靶向抑制CTGF后可阻抑心肌细胞分泌下游纤维化因子,进一步提示CTGF是促心肌纤维化的关键性细胞因子,而RNAi是一种特异高效的很有前途的干预手段.

关键词：心肌细胞、结缔组织生长因子、RNA干扰、心肌纤维化

所属期刊栏目：25

分类号：R542.2+3(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：湖北省教育厅重点资助项目D200624006

在线出版日期：2009-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：422-426