慢病毒介导的中性内肽酶对Aβ诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响

摘要：

目的:探讨脑中性内肽酶(NEP)外源表达对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响.方法:采用脂质体法将含中性内肽酶NEP的四质粒系统慢病毒载体转染293FT包装细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ处理的SK-N-SH细胞,用Western blotting方法检测NEP对Aβ的降解作用、MTT法检测细胞存活率、流式细胞术分析细胞凋亡情况、RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2及bax的表达及caspase-3活性检测.结果:胞内高表达的NEP能够显著降解Aβ,其降解程度与NEP的表达量有剂量依赖关系.细胞存活率及流式细胞术检测结果显示NEP高表达可减轻Aβ诱导的细胞凋亡,细胞存活率于感染病毒后48 h最强,为对照的170%(P<0.01),NEP活性组的凋亡率为3.86%,低于对照组的6.41%;RT-PCR结果显示NEP对Ap诱导的细胞凋亡保护作用可能是通过减少bax的表达,抑制了easpase一3的激活程度来实现的.结论:NEP可以降解A13,可以保护由AB沉积所致的神经细胞凋亡.

关键词：中性内肽酶、慢病毒载体、β淀粉样肽、细胞凋亡、阿尔茨海默病

所属期刊栏目：24

分类号：R741.02(神经病学与精神病学)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金20050422045

在线出版日期：2009-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2470-2474