分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究

摘要：

目的:探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系.方法:构建强力霉素(Dox)调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTBE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆;RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达;Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后,HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达;流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后,hCREG表达与细胞增殖的关系.结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTBE-hCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆;RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1 mg/L),HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加;流式细胞周期分析提示,hCREG表达增加后,HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加.结论:hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖.

关键词：阻遏蛋白质类、血管平滑肌细胞、细胞增殖

所属期刊栏目：24

分类号：R363.2(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30070280,30570664;辽宁省科技攻关计划资助项目2007225004-9

在线出版日期：2009-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2121-2125