人血管细胞中hCREG1基因启动子对血清饥饿发生应答

摘要：

目的:为揭示E1A激活基因阻遏子(CREG1)在人血管平滑肌细胞(VSMCs)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达的调控机制,构建人CREG1(hCREG1)启动子报告基因载体,探讨CREG1在不同血管细胞中的表达.方法:在对hCREG1进行生物信息学分析的基础上,以人基因组DNA为模板,PCR方法扩增含有hCREG1基因上游-3 677 bp序列,构建了hCREG1 5'上游-3 677 bp、-2 310 bp和-945 bp序列片段,分别将这3个序列克隆到pMD18-T载体上并定向亚克隆到pEGFP-1报告基因载体-pEGFP-hCREGI-P3677、pEGFP-hCREG1-P2310和pEGFP-hCREG1-P945.将重组质粒瞬时转染VSMCs株HITASY和HUVECs,检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达.结果:经测序鉴定证实,3个报告基因载体中插入的PCR扩增序列均与hCREG1基因上游DNA序列完全匹配.瞬时转染体外培养的人VSMCs和HUVECs后,经荧光观察和蛋白质印迹(Western blotting)证实,细胞内存在GFP的表达,并且0.5%FBS培养的HITASY细胞中GFP表达较10%FBS培养的细胞中明显增加.HU-VECs中的GFP表达较人VSMCs明显增加.结论:hCREG1基因启动子报告基因载体构建成功,核心启动子存在于5'上游序列的-945 bp-0 bp区域,为进一步研究hCREG1基因表达提供了条件.

关键词：启动区(遗传学)、阻遏蛋白质类、基因、hCREG1

所属期刊栏目：24

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30570664;辽宁省自然科学基金资助项目2050426

在线出版日期：2008-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1483-1489