人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究

摘要：

目的:探讨人小胶质细胞(mieroglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型.方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010 cells/L,接种于75 cm2 培养瓶中(记作first 0d);7-10 d后,进行第1次纯化.此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second 0 d);4-5 d后,混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片,采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化.此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬,接种于培养瓶(记作0 h);2 h后,小胶质细胞贴壁生长,少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中,此时通过移走上清以去除少突胶质细胞,即得到高纯度的小胶质细胞;运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45,CD11b和CD68的阳性率,以计算其纯度;通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能;利用胞膜边缘波动(membrane ruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平.结果:我们所分离的小胶质细胞中,＞98%的细胞表达CD45,CD11b和CD68,并且能够吞噬荧光微球.结论:我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞,所得到的小胶质细胞高表达CD45,CD11b和CD68分子,并且具有很强的吞噬功能,为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础.

关键词：小神经胶质细胞、CD68、吞噬作用

所属期刊栏目：24

分类号：R363(病理学)

资助基金："973"国家重点基础研究资助项目2004CB720100,2006CB504201;广州市科技计划资助项目2006Z1-E0091

在线出版日期：2008-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：939-944