人IL - 6 mRNA的实时定量检测法

摘要：

目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达.方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α.提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品.建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法.(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达.结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上.(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好.(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高.结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA.

关键词：白细胞介素6、RNA、信使、逆转录聚合酶链反应、TaqMan-MGB技术、牛膝多糖

所属期刊栏目：24

分类号：R392.11

在线出版日期：2008-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：206-208