PRL-2基因转染对肝细胞增殖及细胞周期的影响

摘要：

目的:研究PRL-2基因对肝细胞增殖和细胞周期的影响.方法:采用脂质体转染的方法将重组质粒稳定转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆.应用实时荧光定量聚合酶链反应、Western印迹和免疫组化分析PRL-2在阳性细胞的表达及蛋白定位,MTT法检测细胞的群体倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western印迹分析细胞周期素A、D1、E以及周期蛋白依赖激酶抑制因子p16、p21WAF1及p27Kip1的变化,实时荧光定量聚合酶链反应检测p21WAF1mRNA的变化.结果:成功构建PRL-2真核表达载体pcDNA3-PRL-2.脂质体转染细胞经过G418筛选后,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1.经实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组化证实,PRL-2-CL1细胞系PRL-2基因及蛋白表达水平高于对照组,流式细胞仪检测细胞周期S期细胞比例明显增高,MTT法检测细胞群体倍增时间缩短.Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应显示p21WAF1在转染后较对照组明显降低,细胞周期素A、D1、E及p16、p27Kip1无明显变化.结论:重组PRL-2真核表达载体构建正确,并在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达.PRL-2基因具有促进细胞增殖的作用,这种作用与其降低p21WAF1蛋白含量相关.

关键词：肝细胞、蛋白质酪氨酸磷酸酶、真核表达载体、细胞周期

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30100218;广东省科技厅科技计划2004B30301010;2005B30301021

在线出版日期：2008-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2229-2233