白细胞介素1β刺激对脑微血管内皮细胞COX活性、mRNA表达和PGE2释放的影响

摘要：

目的:探讨白细胞介素1B(IL-1β)刺激不同时间对大鼠脑微血管内皮细胞(Rcmec)的环氧合酶(COX)活性及其Mrna表达和PGE2释放的影响.方法:建立Rcmec培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定.细胞长至融合状态后加入IL-1β(30μg/L),分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24 h,ELISA测定细胞内COX-1、COX-2的活性及细胞外液PGE2含量,荧光实时定量PCR检测COX-1、COX-2的mRNA表达量,扩增产物进行熔解曲线图及琼脂糖电泳分析,并与未刺激的rCMEC作比较.结果:①Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见90%以上的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC.②IL-1β刺激4 h时细胞培养液PGE2含量已明显高于未刺激组(P＜0.05); 12 h时PGE2含量达到最大值(P＜0.01); 24 h时PGE2含量有所回降,但与未刺激组比较仍有显著差异(P＜0.05).③IL-1β刺激不同时间rCMEC内COX-1活性与未刺激组相比无统计学差异(P＞0.05); COX-2活性在第8 h时已明显高于未刺激组(P＜0.05),12 h活性达峰值(P＜0.01),24 h活性有所回降,但仍具显著差异(P＜0.05).④IL-1β刺激不同时间COX-1 mRNA表达与未刺激组比较无明显差异(P＞0.05); 未刺激组在本实验条件下未检测到COX-2 mRNA表达,IL-1β刺激lh时可见COX-2 mRNA表达,4 h时COX-2 mRNA表达至峰值,而后开始回降,第12 h时已未见表达.熔解曲线图显示无非特异性扩增; 琼脂糖电泳可见扩增基因与目的基因长度相符,结果与荧光定量PCR一致.结论:IL-1β作用下,rCMEC释放的PGE2持续增加并于12h达峰值,这一过程主要与 COX-2 mRNA表达激活及 COX-2 活性增加有关.

关键词：白细胞介素1、脑、内皮细胞、前列腺素E类、环氧合酶-2

所属期刊栏目：23

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金90209006

在线出版日期：2007-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：710-714