粒-巨噬细胞集落刺激因子与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体构建

摘要：

目的:构建粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒载体.方法:采用RT-PCR方法获得GM-CSF全外显子片段,使之克隆到带GFP慢病毒表达载体质粒FUGW中,经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体.在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-GM-CSF导入病毒包装细胞293T,荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,鉴定.用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测转染FUGW-GM-CSF细胞上清液GM-CSF表达水平,电子显微镜观察293T细胞中的慢病毒.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的GM-CSF/PCR产物与GenBank中的数据完全吻合;GM-CSF准确克隆入FUGW的多克隆位点.慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞,荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光.转染FUGW-GM-CSF包装细胞上清液GM-CSF酶联反应阳性.电子显微镜下见慢病毒颗粒位于293T细胞胞浆的内质网中.结论:成功构建了GM-CSF与GFP融合基因慢病毒载体,为诱导DC提供了适合的稳定转染的载体.

关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、绿色荧光蛋白、慢病毒属

所属期刊栏目：21

分类号：R363(病理学)

资助基金：广东省自然科学基金20020024

在线出版日期：2005-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1448-1451