长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察

摘要：

目的:研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化. 方法: 采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞,采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力.然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养,定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白、尿素氮的水平.采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性(EROD)方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能. 结果: 新鲜分离的大鼠肝细胞总数(2-3)×108cells/whole liver,Percoll分离液纯化后活力和纯度在90%以上.HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态.AST、ALT水平在培养3 d后下降显著,6-9 d后趋于相对稳定的低水平.白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18 d内维持在较高水平.可在3-6 d检测到CYPⅠA1酶活性. 结论: Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度,HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力,适合肝细胞的体外长期培养和功能研究.

关键词：肝细胞、细胞培养

所属期刊栏目：21

分类号：R363(病理学)

资助基金：广东省科技攻关项目99m04905G;广东省自然科学基金021857;广东省卫生厅科研项目2002039

在线出版日期：2005-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1001-1005