用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白

摘要：

@@ 目的:建立有效的T7噬菌体筛选系统,筛选与靶蛋白(信号分子)有结合关系的多肽或蛋白.方法:以p38MAPK、PRAK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂),通过结合-洗脱-扩增3个步骤,筛选噬菌体cDNA文库(T7人肝和/或人肺cDNA文库).结果:选择第四轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行顺序,将获得的序列在美国国立卫生院(NIH)的GenBank数据库中进行同源序列比较,获得若干编码蛋白的序列.在这些蛋白中有激酶、转录因子、细胞骨架相关蛋白和离子通道相关蛋白等.结论:T7噬菌体展示筛选系统是用来筛选新的结合蛋白一个非常简单、快速和有效的工具,筛选的p38和PRAK结合蛋白对进一步研究MAPK信号转导通路的复杂功能和调节机制提供了很好的机会.

机标关键词：噬菌体展示、筛选系统、靶蛋白、相关蛋白、结合蛋白、信号转导通路、转录因子、序列比较、信号分子、细胞骨架、洗脱、文库、离子通道、扩增、结合关系、复杂功能、调节机制、编码蛋白、卫生院、特异性

所属期刊栏目：19

分类号：R4(临床医学)

在线出版日期：2004-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共1页

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