单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷系统对人骨肉瘤细胞杀伤作用的研究
目的:观察单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)基因治疗系统对骨肉瘤细胞株OS732的杀伤作用并研究其作用机制。方法: 构建含HyTK基因的逆转录病毒载体DORHyTK,用DOTAP将其转入骨肉瘤细胞株OS732;提取阳性转染细胞(OS732TK)的DNA和总RNA,分别用PCR和斑点杂交的方法检测转染的效果;用MTT比色法测定OS732TK对GCV的敏感性及旁观者效应;Hoeschst 332258染色,电镜和流式细胞仪分析HSV-TK/GCV系统对OS732TK细胞杀伤作用的机制。结果:成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK。OS732TK细胞整合了TK基因并有稳定的转录产物。5 mg/L GCV作用5 d即可杀伤所有OS732TK细胞。旁观者效应在高、低两种细胞密度接种条件下均存在,且前者强于后者。Hoeschst 332258染色及电镜均显示典型的细胞凋亡特征,但也有少量坏死细胞的存在。流式细胞仪分析的结果说明在GCV作用下,OS732TK细胞阻滞于细胞周期的G0-G1期。 结论: HSV-TK/GCV基因治疗系统对骨肉瘤细胞株OS732有很强的杀伤作用,且存在明显旁观者效应。此系统导致了OS732细胞周期的紊乱,引起细胞的凋亡和坏死。HSV-TK/GCV基因治疗系统为骨肉瘤的治疗提供新的思路。
骨肿瘤、基因疗法、遗传学
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R738.1(肿瘤学)
中山医科大学校科研和教改项目98028
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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