柯萨奇病毒A组10型免疫荧光检测方法的建立及其在灭活验证中的应用

摘要：

目的 建立检测柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)病毒颗粒的免疫荧光检测方法,使用该方法对病毒的灭活进行辅助验证.方法 在非洲绿猴肾细胞(African green monkey kidney cell,Vero)、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human malignant embryonic rhabdomyoma cells,RD)、非洲绿猴胚胎肾细胞(African green monkey embryonic kidney cells,MA104)三种细胞上检测病毒滴度,绘制滴度曲线确定最敏感细胞;以兔抗CVA10多克隆抗体为一抗、Alexa Fluor? 594偶联的山羊抗兔IgG为荧光二抗,对实验条件进行优化,建立检测CVA10的免疫荧光方法,并与灭活验证中细胞盲传实验结果进行比较.结果 RD细胞为CVA10最敏感细胞,一抗最佳稀释度为1∶ 100,二抗最佳稀释度为1∶ 200.病毒感染RD细胞后24 h可检测到的病毒量下限为50 CCID50/ml,感染4 d时的检测下限为0.5 CCID50/ml.Vero细胞为CVA10的较敏感细胞,相同条件下,病毒感染Vero细胞后24h可检测到的病毒下限为80CCID50/ml,5d时的检测下限为1CCID50/ml.灭活验证中,免疫荧光结果与细胞盲传实验结果具有一致性.结论 成功建立了 CVA10的免疫荧光检测方法,该方法可辅助细胞盲传实验进行灭活验证.

关键词：柯萨奇病毒A组10型、灭活验证、免疫荧光检测、敏感性

所属期刊栏目：13

分类号：R-331(医学研究方法)

资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目2021-I2M-1-043

在线出版日期：2023-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：48-54