质谱法分析肠道病毒71型疫苗原液的主要蛋白成分
目的 采用质谱法对我国2家进入临床试验肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的主要蛋白成分进行分析和比较,为完善EV71疫苗的质控方法提供实验依据.方法 应用梯度SDS-PAGE法对2家生产自Vero细胞的EV71疫苗原液(A、B原液)进行蛋白电泳分析,蛋白条带经切胶回收、脱色、胰酶酶切后提取蛋白多肽,采用液质联用仪(LC/MS)对回收的各条带蛋白多肽进行二级质谱序列测定.采用酶联免疫法(ELISA)和二喹啉甲酸法(BCA)分别检测浓缩后的疫苗原液中EV71抗原含量和总蛋白含量,计算比活值.结果 将原液浓缩10余倍后经梯度SDS PAGE电泳分析,抗原A为4条带,抗原B为6条带.采用质谱法检测各条带蛋白并搜库分析发现,各条带均含有EV71多聚蛋白;抗原A条带1、3和抗原B的条带1、3、4、5、6含有猴源蛋白.经PSMs(鉴定多肽次数)计算发现EV71蛋白占总蛋白比例分别为96.7％和95.0％,比活值为865.5、291.8 U/μg.结论 质谱法可作为疫苗中蛋白检测的辅助方法,并考虑在多批次检测的基础上提出限量要求,为疫苗质量的一致性提供保障.
肠道病毒71型(EV71)、疫苗、蛋白、质谱(MS)
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R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家高技术研究发展计划863计划2012AA02A402
2014-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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