Ca2+在顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞自噬反应中的作用

摘要：

背景与目的：Ca2+在维持细胞生物活性方面扮演着很重要的角色，其在细胞内的储存、释放和摄取主要受内质网调节，细胞内Ca2+浓度的稳态是维持细胞生物能量代谢、蛋白质折叠和分泌的基础条件。本研究探讨Ca2+在顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激-自噬反应中的作用机制。方法：取人卵巢癌SKOV3细胞系为研究对象，按以下步骤分组：①探讨顺铂诱导内质网应激与自噬反应，用6μg/mL的顺铂处理SKOV3细胞0、6、12和24 h；②了解顺铂和毒胡萝卜内酯(thapsigargin, TG)诱导内质网应激释放的Ca2+与自噬的关系，分别用TG和顺铂处理SKOV3细胞0、9和12 h；③探究Ca2+对自噬的作用机制，分成对照组、顺铂组、TG组、BAPTA-AM组、顺铂联合BAPTA-AM组和TG联合BAPTA-AM组。用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78和自噬标志性蛋白LC3蛋白的表达水平；用Fluo-4钙离子荧光探针检测细胞质中的Ca2+浓度变化；间接免疫荧光染色后，用共聚焦显微镜检测LC3蛋白的表达情况。结果：SKOV3细胞经6μg/mL顺铂作用6 h时GRP78灰度值(1.393±0.004)与其对照组(0.679±0.011)相比显著提高(t=113.2，P=0.000)，在12 h时LC3灰度值(0.072±0.002)与其对照组(0.038±0.000)相比显著提高(t=25.5，P=0.000)。间接免疫荧光结果显示，顺铂(6μg/mL)组和TG(3μmol/L)组随作用时间的延长，细胞内LC3荧光斑点会逐渐增多，并伴随着细胞质Ca2+浓度上升。后经钙离子络合剂BAPTA-AM干预后，细胞内LC3荧光强度进一步增强。Westren blot结果显示，顺铂组LC3灰度值(0.039±0.000)小于顺铂联合BAPTA-AM组(0.071±0.001)，TG组(0.035±0.001)小于TG联合BAPTA-AM组(0.065±0.001)，差异有统计学意义(P=0.000)。结论：顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激和自噬的发生，并伴随着细胞质内Ca2+浓度的上升。络合细胞质内Ca2+能增强顺铂诱导的自噬反应。

关键词：顺铂、Ca2+、内质网应激、自噬

所属期刊栏目：26

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81372793；吉林省教育厅十三五科技项目2016237；2014吉林省大学生创新创业项目2014001。

在线出版日期：2016-06-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：313-319