维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响

摘要：

背景与目的：维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G，RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline，DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系，并观察其对A549细胞增殖的作用。方法：采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段，利用LR重组系统构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体，对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后，感染A549细胞；采用有限稀释法筛选稳定株；使用细胞免疫荧光和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果；CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果：成功构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体，包装后测得其活性滴度为1.0×108TU/mL；慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×109 VP/mL；RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达，并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后，A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107vs 2.099±0.162，P<0.05)。结论：本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株；RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。

关键词：维甲酸诱导基因G、慢病毒、表达调控、细胞增殖

分类号：R73-35+1(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81272603，81472179；上海市浦江人才计划13PJ1407300；2013年教育部留学回国人员科研启动基金；上海申康医院发展中心课题SHDC22014008。

在线出版日期：2015-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：566-571