等位基因特异扩增实时定量PCR检测HIV的V106I耐药突变位点的方法建立

摘要：

目的 建立等位基因特异扩增实时定量聚合酶链式反应(ASPCR)检测艾滋病病毒(HIV)V106I耐药突变位点的方法,用于快速检测低比例的V106I突变.方法 针对HIV的V106I多态性位点设计引物,建立检测方法.构建野生型和突变型质粒标准品,检测野生型质粒、突变型质粒和临床样本,评价方法的准确性、灵敏度和特异性.结果 5份接受抗病毒治疗的HIV感染者本底血清标本(2份存在V106I耐药突变位点,3份不存在V106I耐药突变位点),特异性引物扩增105野生型质粒和突变型质粒的循环阈值(Ct值)之差(△Ct)为10.26,ASPCR法能正确区分野生型和突变型质粒,临界值为9.26;对100％～0.01％的突变型质粒和野生型质粒混合物的检测显示,突变比例高于1％时得到相应的ACt值均＜9.26,根据标准曲线计算出的突变比例与理论值具有较好的吻合度,ASPCR法检测V106I突变的灵敏度可达到1％突变比例.结论 建立的ASPCR方法可用于检测临床样本V106I耐药突变位点.

关键词：等位基因特异扩增实时定量聚合酶链式反应、V106I、耐药突变

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分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：嘉兴市科技计划项目2015AY23052

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：779-782