高通量荧光底物HIV-1蛋白酶模型的建立

摘要：

目的 应用荧光方法建立、优化、评价艾滋病病毒1型(HIV-1)蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,并用于大规模样品筛选.方法 将p100w表达质粒转化E.coli细菌细胞,使其表达包涵体形式的HIV-1蛋白酶融合蛋白,制备纯化自剪切后成熟的HIV-1蛋白酶.通过测定Km值及已知HIV蛋白酶抑制药的IC50对酶进行鉴定.优化酶反应体系,评价模型的可靠性.建立、比较HPLC酶切分析法及荧光底物法两种测定酶活性方法.结果 建立了高通量HIV-1蛋白酶筛选模型,经优化减少酶及底物用量,降低了成本.在模型可靠性评价中,Z因子达到0.786以上.在对9 000个微生物发酵产物样品的筛选中,验证了方法的可应用性,并获得阳性菌株41个.结论 所建立的荧光方法高通量筛选模型稳定可靠,效率比传统的HPLC酶切分析法提高,适用于大规模筛选HIV-1蛋白酶抑制剂.

关键词：艾滋病病毒、蛋白酶、荧光底物、高通量筛选

所属期刊栏目：12

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：科技部重点项目

在线出版日期：2006-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：402-405