SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因沉默对CaM、CaMKⅡ蛋白水平的影响
目的 构建稳定的α7 nAChR沉默的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞,研究α7神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对钙调蛋白(CaM)、钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)水平的影响,了解α7 nAChR神经保护作用及其与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系.方法 将α7 nAChR shRNA重组质转染到SH-SY5Y,用含嘌呤霉素的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法(Western-blot)检测细胞中α7nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化;Western-blot方法测定CaM、CaMKⅡ蛋白表达水平.结果 获得稳定转染α7 nAChR shRNA重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达量分别减少了95％和80％.CaM、CaMKⅡ蛋白表达量分别减少了48.5％和35％.结论 成功构建了α7nAChR mRNA沉默的SH-SY5Y细胞细胞株,α7 nAChR沉默降低了CaM、CaMKⅡ的蛋白水平,可能影响信号通路转导,这可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系.
RNA干扰、α7神经型尼古丁受体、CaM、CaMKⅡ、SH-SY5Y细胞
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Q51;R749.1*6(蛋白质)
国家自然科学基金资助项目81360178;教育部“长江学者和创新团队发展计划资助”IRT13058;贵州省科技厅重大专项黔科合重大专项字2014 [6008];贵州省科技厅项目201344,黔科合SY字[2013]3020
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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