RAB25沉默抑制结直肠癌细胞铁死亡的作用研究

摘要：

目的:探讨沉默RAS相关结合蛋白25(ras-associated binding protein 25,RAB25)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞铁死亡中的作用.方法:利用GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库分析RAB25的表达水平及与铁死亡关键基因表达之间的关联.在CRC细胞系HCT116上构建慢病毒介导的RAB25沉默细胞株(shRAB25),应用定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白印迹法检测RAB25的表达情况.应用细胞增殖与毒性检测法(CCK8)检测不同浓度的(0～20μmol/L)铁死亡诱导剂erastin对沉默RAB25后细胞活力的影响;利用荧光显微镜和透射电镜分别观察erastin对沉默RAB25后的细胞形态和线粒体结构的影响;使用C11-BODIPY染色和流式细胞仪检测erastin对沉默RAB25后的细胞脂膜过氧化水平的影响.检测erastin与西妥昔单抗对沉默RAB25后的细胞活力的联合作用.结果:RAB25在CRC中表达升高(P<0.01);RAB25表达与铁死亡关键基因表达明显相关.当erastin≥10μmol/L时,与阴性对照组(空载慢病毒感染阴性组)相比,RAB25沉默组抑制了铁死亡导致的细胞杀伤(P<0.0001),细胞形态和线粒体结构更清晰完整;流式细胞术检测结果提示,细胞脂膜过氧化水平明显下降(P<0.0001).RAB25表达使erastin和西妥昔单抗对HCT116细胞的联合杀伤作用明显增强.结论:沉默RAB25可抑制erastin诱导的CRC细胞铁死亡;RAB25可协同铁死亡诱导剂erastin诱导铁死亡,增强西妥昔单抗的疗效.

关键词：结直肠癌、RAS相关结合蛋白25、铁死亡

所属期刊栏目：21

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;上海市卫生健康委员会科研课题

在线出版日期：2023-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：710-718