基于Hippo/YAP信号通路探究粉防己碱抗乳腺癌耐药机制

摘要：

目的 研究粉防己碱通过调控Hippo/Yes-相关蛋白同源癌蛋白(homologous oncoproteins Yes-associated protein,YAP)信号通路抗乳腺癌多重耐药的分子机制.方法 采用CCK-8法检测粉防己碱对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖的影响;采用倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞形态;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用细胞集落实验检测细胞克隆形成能力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用Western blotting检测细胞耐药外排蛋白[P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)],Hippo通路关键节点蛋白[YAP1、大肿瘤抑制激酶1(large tumor suppressor kinase 1,LATS1)、哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian Sterile 20-like kinase 1,MST1)、转录共活化因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,TAZ)]和凋亡关键蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、细胞色素 C(cytochrome-C,Cyt-C)、B淋巴细胞瘤-2(B-celllymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)]表达.结果 粉防己碱对MCF-7/ADR细胞具有增殖抑制作用,半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为14.20 μmol/L;粉防己碱能够改变细胞形态,部分细胞出现凋亡迹象;粉防己碱显著诱导MCF-7/ADR细胞发生凋亡(P＜0.01),抑制细胞的增殖分化和侵袭能力,显著下调 P-gp、BCRP、MRP1、YAP1、TAZ 和 Bcl-2 蛋白表达(P＜0.01),显著上调 MST1、LATS1、Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达(P＜0.01).结论 粉防己碱能够通过下调MCF-7/ADR细胞P-gp、BCRP和MRP1蛋白表达,抑制外排蛋白活性,增加细胞内粉防己碱含量蓄积;并通过激活Hippo信号通路,上调MST1蛋白表达,激活LATS1,进而调控下游靶点YAP1和TAZ表达,进一步上调Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,启动细胞凋亡程序,发挥抗肿瘤作用.

关键词：粉防己碱、乳腺癌、阿霉素、耐药性、Hippo/YAP信号通路

所属期刊栏目：54

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：中国博士后面上项目;黑龙江省自然科学基金优秀青年项目;黑龙江省博士后资助项目;哈尔滨商业大学产业化项目

在线出版日期：2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：5960-5967