水牛角中含巯基肽类成分的富集及抗氧化、抗炎活性研究

摘要：

目的 富集水牛角BubaliCornu中含疏基肽类成分(thiols-rich peptide fractions,SHPF)并探讨其抗氧化、抗炎活性.方法 通过疏基亲和树脂Thiopropyl Sepharose 6B从水牛角提取液中富集得到SHPF,并采用Ellman法测定游离疏基(-SH)含量;应用单因素实验法优选富集工艺;基于Nano LC-MS/MS技术鉴定SHPF.体外通过H2O2诱导小鼠脑微血管内皮细胞bEnd3氧化损伤,采用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测SHPF抗氧化活性;通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症损伤,采用实时荧光定量PCR法测定炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌.结果 优化SHPF富集工艺为上样量10 μmol游离-SH、吸附时间1 h、洗脱剂为含β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-Me)洗脱剂.从水牛角富集液中共鉴定到704条肽段,其中154条含半胱氨酸(cysteine,Cys)肽段,占总肽段的21.9％,主要来源于角蛋白和角蛋白相关蛋白.体外细胞实验结果表明,SHPF能够提高氧化损伤bEnd3细胞的存活率,同时降低其LDH的泄露,并减少炎症损伤RAW264.7细胞炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌.结论 采用优选富集工艺能明显提高SHPF的富集效率,SHPF具有良好抗氧化和抗炎活性,为水牛角"清热解毒"功效物质基础的研究提供了研究思路和方向.

关键词：水牛角、含疏基肽类、富集、抗氧化、抗炎、Nano LC-MS/MS技术、乳酸脱氢酶、实时荧光定量PCR法、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、角蛋白、清热解毒

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分类号：R283.6(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;国家重点研发计划;江苏省高校青蓝工程中青年学术带头人;江苏省农业科技自主创新项目

在线出版日期：2023-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2741-2749