基于PERK/Nrf2信号通路研究山豆根提取物诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制

摘要：

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子 2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma extract,TSRE)诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制.方法 为研究TSRE对鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,设置对照组和TSRE低、中、高剂量(100、200、400mg/L)组;为研究铁死亡在TSRE致CNE1细胞增殖抑制中的作用以及PERK/Nrf2信号通路对铁死亡的影响,TSRE处理过程中分别用铁死亡抑制剂Fer-1、PERK抑制剂GSK2606414、Nrf2siRNA进行干预.MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化水平;比色法检测铁离子和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blotting检测溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathioneperoxidase4,GPX4)、p-PERK、Nrf2 和血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)蛋白表达;免疫荧光检测p-PERK表达和Nrf2入核情况.结果 TSRE组细胞存活率以及SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05、0.01),G0/G1期和S期细胞比例显著降低(P＜0.05、0.01),G2/M期细胞比例显著增加(P＜0.05、0.01),Fe2+、ROS和脂质过氧化水平升高(P＜0.01),GSH水平显著降低(P＜0.01);与TSRE组比较,Fer-1干预缓解了 TSRE诱导的细胞存活率降低(P＜0.01),降低CNE1细胞中Fe2+、ROS及脂质过氧化水平(P＜0.01),提高细胞中GSH水平(P＜0.01).机制研究表明,TSRE诱导Nrf2表达水平的升高并促进Nrf2入核(P＜0.01);与NC siRNA组比较,Nrf2siRNA能抑制TSRE引起的细胞脂质过氧化和Fe2+水平升高和GSH水平降低(P＜0.01).进一步研究发现,TSRE组细胞中的p-PERK蛋白表达水平较对照组明显升高(P＜0.01);PERK抑制剂GSK2606414减弱了 TSRE诱导的Nrf2信号活化(P＜0.01).结论 TSRE诱导的鼻咽癌细胞铁死亡可能与其激活PERK/Nrf2信号通路有关.

关键词：山豆根提取物、鼻咽癌细胞、铁死亡、蛋白激酶R样内质网激酶、核因子E2相关因子2、苦参碱、氧化苦参碱

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：河南中医药大学研究生科研能力创新提升计划项目;河南省中医药科学研究专项课题

在线出版日期：2023-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2471-2479