基于分子对接与实验验证的板蓝根及其活性成分抗乙型肝炎病毒作用机制研究

摘要：

目的 通过体外实验评价板蓝根Isatidis Radix及活性成分4-羟基-1H-吲哚-3-甲醛对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的抑制作用,并探索其基于调控视黄酸诱导基因蛋白Ⅰ-线粒体抗病毒信号蛋白(retinoic acid-inducible gene Ⅰ-mitochondria antiviral signaling protein,RIG-Ⅰ-MAVS)信号通路的抗病毒机制.方法 采用CCK-8方法在HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15细胞分析板蓝根毒性,选择安全药物浓度进行抗HBV实验研究,计算药物对HBVDNA、乙型肝炎E抗原(HBeAg)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抑制率,评价板蓝根抗病毒药效;采用Western blotting方法检测板蓝根对宿主免疫相关RIG-Ⅰ-MAVS信号通路中关键信号蛋白RIG-Ⅰ、MAVS、干扰素调节因子7(interferon regulated-factor 7,IRF7)、磷酸化IRF7(phosphorylated IRF7,p-IRF7)表达水平的影响.基于TCMSP数据库检索板蓝根中的活性成分,使用Schr?dinger软件将板蓝根活性成分与RIG-Ⅰ、MAVS、IRF7蛋白进行分子对接,初步筛选板蓝根中的抗HBV潜在活性成分,选定分子对接结果中与靶标蛋白结合能力较强的活性成分进行抗HBV活性评价并对其作用机制进行探索.结果 板蓝根对HepG2.2.15细胞中HBVDNA、HBeAg、HBsAg均具有明显的抑制作用(P＜0.05、0.01、0.001),抑制率分别为54.67％、23.29％、66.62％;板蓝根可上调RIG-Ⅰ、MAVS、IRF7、p-IRF7蛋白的表达,对RIG-I的上调作用最为显著(P＜0.001);分子对接结果显示,4-羟基-1H-吲哚-3-甲醛与RIG-Ⅰ、MAVS、IRF7蛋白具有较强的亲和力,结合能分别为-5.218、-6.525、-6.813kJ/mol;4-羟基-1H-吲哚-3-甲醛对 HepG2.2.15 细胞的 HBVDNA、HBeAg、HBsAg 的抑制率分别为 33.87％、28.14％、46.14％,可促进RIG-Ⅰ、MAVS、IRF7、p-IRF7蛋白的表达.结论 板蓝根及活性成分4-羟基-1H-吲哚-3-甲醛均可抑制HBV DNA、HBeAg、HBsAg的分泌,可能通过上调RIG-Ⅰ-MAVS信号通路发挥抗HBV作用.

关键词：板蓝根、4-羟基-1H-吲哚-3-甲醛、乙型肝炎病毒、抗病毒作用、RIG-Ⅰ-MAVS信号通路

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;河南省中医药科学研究专项

在线出版日期：2023-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2127-2134