鸢尾糖基转移酶编码基因ItUGT349和ItUGT419克隆及特性研究

摘要：

目的 克隆获得鸢尾Iris tectorum 糖基转移酶基因ItUGT349和ItUGT419,并对其进行生物信息学分析、基因差异表达检测和蛋白原核表达等特性分析.方法 以鸢尾转录组中筛选到的ItUGTs基因全长开放阅读框(open reading frame,ORF)设计特异性引物,进行PCR扩增,经测序后获得基因序列并进行生物信息学分析;通过荧光定量PCR(real-time PCR,qRT-PCR)进行基因差异表达检测;最后构建pET-32a(+)原核表达载体在大肠杆菌中表达蛋白.结果 PCR扩增ItUGT349和ItUGT419的ORF长度分别为1461、1488bp,编码蛋白相对分子质量大小分别为53 830、54 910.荧光定量PCR显示,ItUGT349的表达量在叶片中最高,而ItUGT419在花器官中表达最高.进化树表明,ItUGT419与三萜类糖基转移酶聚类在一起,ItUGT349与三萜、黄酮和木质素等多种类型的糖基转移酶聚类到一支.ItUGT349和ItUGT419在大肠杆菌中均成功的表达出可溶性蛋白.结论 通过ItUGT349和ItUGT419基因全长ORF克隆,并对其进行序列分析,基因差异表达检测及原核表达等研究,为后续进一步鉴定其催化功能奠定基础.

关键词：鸢尾、糖基转移酶、基因克隆、生物信息学分析、原核表达、qRT-PCR

所属期刊栏目：54

分类号：R286.12(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;广东省基础与应用基础研究基金项目;广东省基础与应用基础研究基金项目;广东省级大学生创新训练项目;广东省级大学生创新训练项目

在线出版日期：2023-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：254-261