表小檗碱调控CD39-NLRP3-GSDMD焦亡路径改善脓毒症肺损伤的机制研究

摘要：

目的 基于 CD39-NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)-GSDMD焦亡路径探究表小檗碱改善脓毒症肺损伤的作用机制.方法 通过AMP-Glo TM实验考察黄连异喹啉生物碱成分小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱及药根碱的CD39酶促活性.小鼠ip脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,12mg/kg)建立脓毒症肺损伤模型,分别于造模前24h和造模0.5h后给予表小檗碱或MCC950,造模后24h,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠肺组织病理变化;计算肺组织湿质量/干质量,评价肺肿胀;ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和 IL-17A 水平.采用 1 μg/mLLPS联合 5 mmol/L 三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)/5 μmol/L nigericin/150μg/mL MSU 或转染 0.5 μg/mL poly(dA:dT)刺激人源单核细胞白血病THP-1细胞复制炎症模型,给予表小檗碱或VX-765干预,采用Western blotting法检测细胞CD39-NLRP3-GSDMD路径蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-1β水平;采用免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用扫描电镜评价细胞焦亡情况;采用BzATP介导配体门控离子通道受体7(ligand-gated ion channel receptor 7,P2X7)通道开放,考察表小檗碱对P2X7功能的作用.结果 表小檗碱的CD39酶促活性最佳,半数致死浓度(median effective concentration,EC50)值为14.23 pmol/L.与对照组比较,模型组小鼠肺组织结构异常并显示炎性浸润,且肺肿胀明显(P＜0.01),肺泡灌洗液中炎性因子水平显著上调(P＜0.01);表小檗碱干预后,以上变化得到了有效逆转(P＜0.05、0.01),并呈剂量相关性.以上药效与表小檗碱上调CD39蛋白表达水平、抑制P2X7过表达、干扰NLRP3炎症小体组装、降低GSDMD-N蛋白表达水平、逆转GSDMD介导的巨噬细胞焦亡并降低IL-1p水平有关(P＜0.05、0.01).结论 表小檗碱通过抑制脓毒症肺损伤小鼠肺泡灌洗液中IL-1β、MCP-1和IL-17A水平逆转肺损伤和肺肿胀,进一步改善脓毒症肺损伤,可能与调控CD39-NLRP3-GSDMD焦亡路径相关.

关键词：表小檗碱、脓毒症肺损伤、CD39、炎症小体、焦亡

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;中国博士后科学基金面上资助地区专项支持计划;四川省自然科学基金面上项目;成都中医药大学杏林学者提升计划

在线出版日期：2023-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：112-121